流式细胞术是一种先进的技术，通过流式细胞仪对快速直线流动的单列细胞或生物颗粒进行快速的多参数定性和定量分析，具备检测速度快、测量指标多、数据采集量大等优点。Elabscience老师总结了在流式实验中可能遇到的三大常见问题，希望能帮助科研人员有效避免错误！

无信号或信号弱的可能原因及解决方案

1. 抗体贮存不当：抗体需在2-8℃避光保存，且避免反复冻融。

2. 抗体过期使用：确保抗体在保质期内使用。

3. 过度固定：选用新鲜样本进行检测，并通过预实验确认适合的固定剂和条件。

4. 荧光染料淬灭：抗体和样本应避光保存，完成染色后尽快上机操作。

5. 自发荧光较高：使用空白对照确认自发荧光水平，并根据配色原则选择适当的流式抗体染色时间和温度。

荧光强度过高的可能原因及解决方案

1. 染色时间过长：参考说明书，根据实验情况调整抗体染色条件。

2. 抗体浓度过高：滴定抗体以确定最佳浓度。

3. 补偿不当：选择发射光谱不重叠的染料，并检查补偿设置。

4. 洗涤不充分：优化洗涤步骤，增加洗涤次数。

背景高的可能原因及解决方案

1. 死细胞或粘连体非特异性结合：使用新鲜样本，并使用死活染料排除死细胞。

2. 染色时间过长：参考说明书，根据实验情况适当调整染色时间。

3. 自发荧光：用空白对照确定自发荧光水平，并根据荧光素强度选择合适的流式抗体。

4. 补偿不当：检查补偿设置，确保每种荧光染料的信号准确补偿。

在实际操作中，实验结果受多种因素影响，包括抗体选择、样本准备、实验操作及仪器设置。我们总结了实验中常见的三种异常情况及其解决方案，希望能帮助大家获得理想的实验结果。如需更多流式实验相关的知识，请关注俄罗斯专享会284，持续为您提供丰富的干货信息！