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小鼠纤维肉瘤细胞MCA-205培养指南 - 俄罗斯专享会284

发布时间:2025-01-20   信息来源:邓阳竹

**小鼠纤维肉瘤细胞MCA-205培养指南**

小鼠纤维肉瘤细胞MCA-205培养指南 - 俄罗斯专享会284

一、细胞培养条件

细胞名称:MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞
生长特性:贴壁生长
冻存条件:使用无血清冻存液(货号:C7001)
培养体系:1640培养基+10% fetal bovine serum (FBS)
传代建议:第一次可进行1:2的传代
备注:使用无菌离心管收集培养基,作为过渡对比培养。如果对比培养效果不佳,建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理方法

收到细胞后,待其处于良好状态时,灌满完全培养液并封好瓶口,这是运输细胞的最佳方式。在细胞收到后,用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒,并放入超净工作台内,严格遵循无菌操作规范。接下来,将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时,以确保细胞状态的稳定,然后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞的生长情况,并在不同倍数下拍照保存(建议分别拍摄40x、100x及200x的照片)。前三天的照片为重要售后依据,如未提供照片将默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%,可将瓶内完全培养液收集至离心管中,并保留5ml培养基在37℃、5% CO2的孵箱中继续培养。如细胞密度超80%,则可进行传代,具体步骤如下:

  1. 弃去培养上清,使用无钙、镁PBS对细胞进行1-2次润洗。
  2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中,放入37℃培养箱中消化1-2分钟。并在显微镜下观察细胞消化状态,若大多数细胞变圆并脱落,迅速将培养瓶取回,吹打几下后,加入5ml以上完全培养基以终止消化。
  3. 轻轻吹打细胞,确保其完全脱落后吸出,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2ml完全培养基重悬。
  4. 按1:2比例将细胞悬液分瓶传代(两个T25瓶),再补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

  1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃去培养液并使用PBS清洗细胞一次。
  2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶,轻轻摇晃后观察,待细胞回缩变圆时,加入5ml完全培养基以终止消化,用吹管轻轻吹打使细胞脱落,转移悬液至15ml离心管中,1000rpm离心5分钟。
  3. 弃去上清,沉淀细胞后加入1ml的无血清冻存液(货号:C7001),混匀后转移至冻存管中。
  4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中,若以后需转入液氮罐,需在-80℃冰箱中存放至少24小时后再进行转移。

c. 细胞复苏

  1. 从液氮中取出细胞冻存管(请佩戴防护面具),快速将其置于37℃水浴中解冻,直至冻存管内无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
  2. 将冻存管内的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5分钟。
  3. 弃去上清,将细胞重悬于5ml完全培养基中并接种至T25培养瓶中,再放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。
  4. 次日,使用新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞可能比较特殊,如贴壁不牢,在运输过程中可能会发生细胞脱落,这属于正常现象。请将培养瓶内的所有培养液收集至离心管,进行1000rpm离心5分钟,收集上清作为过渡培养(后期对比培养),沉淀部分加胰蛋酶1-2ml,轻轻吹打后,重悬,消化1-2分钟后,再加5ml完全培养基终止反应。随后离心,弃去上清,补加1-2ml完全培养基重悬,如此按1:2比例分瓶传代(两个T25),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,再放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

  1. 关于细胞出现问题的重发情况及判定标准:
    • 运输过程中遇到问题(如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等)可重发;
    • 细胞污染问题需在收到产品48小时内提供真实实验结果,经核实后可重发;
    • 常温发货的细胞经静置24小时后,干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内大多数细胞未存活(需提供细胞状态照片),可重发;
    • 若干冰冻存发货的细胞复苏后24小时或常温发货的细胞静置4小时未开封而出现污染,可重发;
    • 细胞活性问题需在收到产品7天内提供真实实验结果,通过台盼蓝染色法鉴定细胞活力,经核实后可重发;
    • 请于收到当天及第2、3天拍照,若3天未告知,将视为产品合格。提到的情况需提供前三天照片及操作步骤,经过技术人员确认问题责任,可选择重发。
  2. 不予重发的情况包括:
    • 由客户造成的细胞污染;
    • 因客户操作不当导致细胞状态不佳;
    • 非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳;
    • 细胞状态不佳未提供细胞培养前3天照片;
    • 已对细胞进行其他处理;
    • 收到细胞2天内未告知;
    • 具体情况需视情况而定。

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