**小鼠纤维肉瘤细胞MCA-205培养指南**

一、细胞培养条件

细胞名称：MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞
生长特性：贴壁生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640培养基+10% fetal bovine serum (FBS)
传代建议：第一次可进行1:2的传代
备注：使用无菌离心管收集培养基，作为过渡对比培养。如果对比培养效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞处理方法

收到细胞后，待其处于良好状态时，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。在细胞收到后，用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，并放入超净工作台内，严格遵循无菌操作规范。接下来，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以确保细胞状态的稳定，然后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞的生长情况，并在不同倍数下拍照保存（建议分别拍摄40x、100x及200x的照片）。前三天的照片为重要售后依据，如未提供照片将默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，可将瓶内完全培养液收集至离心管中，并保留5ml培养基在37℃、5% CO2的孵箱中继续培养。如细胞密度超80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用无钙、镁PBS对细胞进行1-2次润洗。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟。并在显微镜下观察细胞消化状态，若大多数细胞变圆并脱落，迅速将培养瓶取回，吹打几下后，加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例将细胞悬液分瓶传代（两个T25瓶），再补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液并使用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶，轻轻摇晃后观察，待细胞回缩变圆时，加入5ml完全培养基以终止消化，用吹管轻轻吹打使细胞脱落，转移悬液至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，若以后需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放至少24小时后再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），快速将其置于37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管内的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，将细胞重悬于5ml完全培养基中并接种至T25培养瓶中，再放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。
4. 次日，使用新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞可能比较特殊，如贴壁不牢，在运输过程中可能会发生细胞脱落，这属于正常现象。请将培养瓶内的所有培养液收集至离心管，进行1000rpm离心5分钟，收集上清作为过渡培养（后期对比培养），沉淀部分加胰蛋酶1-2ml，轻轻吹打后，重悬，消化1-2分钟后，再加5ml完全培养基终止反应。随后离心，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬，如此按1:2比例分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，再放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1. 关于细胞出现问题的重发情况及判定标准：
   • 运输过程中遇到问题（如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等）可重发；
   • 细胞污染问题需在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发；
   • 常温发货的细胞经静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内大多数细胞未存活（需提供细胞状态照片），可重发；
   • 若干冰冻存发货的细胞复苏后24小时或常温发货的细胞静置4小时未开封而出现污染，可重发；
   • 细胞活性问题需在收到产品7天内提供真实实验结果，通过台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后可重发；
   • 请于收到当天及第2、3天拍照，若3天未告知，将视为产品合格。提到的情况需提供前三天照片及操作步骤，经过技术人员确认问题责任，可选择重发。
2. 不予重发的情况包括：
   • 由客户造成的细胞污染；
   • 因客户操作不当导致细胞状态不佳；
   • 非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳；
   • 细胞状态不佳未提供细胞培养前3天照片；
   • 已对细胞进行其他处理；
   • 收到细胞2天内未告知；
   • 具体情况需视情况而定。

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