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俄罗斯专享会284哺乳动物细胞冷冻保存方案

发布时间:2025-03-12   信息来源:梅玛宝

细胞冷冻保存是一种在低温条件下保存细胞的方法,旨在长时间维持细胞的活性和功能。这一技术对细胞系的长期保存、实验的可重复性、基因库的构建以及细胞治疗的储备等方面具有重要的医学意义。通过冷冻保存,可以有效减少细胞在传代过程中的遗传变异,同时避免因污染、环境变化或实验操作失误所导致的细胞损失。冷冻保存的最佳时机是在细胞处于最佳生长阶段时。

俄罗斯专享会284哺乳动物细胞冷冻保存方案

冷冻保护剂是细胞冷冻保存中的关键成分,常用的包括二甲基亚砜(DMSO)和甘油。这些保护剂的主要功能是降低溶液的冰点,减少冰晶的形成,从而保护细胞免受机械损伤。DMSO适用于大多数细胞类型,但部分细胞对其敏感,此时可以考虑使用甘油替代。

实验步骤

第1阶段: 冷冻保存

  1. 在冷冻管上标记日期、研究人员姓名、细胞编号、传代数和细胞类型等信息(如基因改造等)。
  2. 对于贴壁细胞,首先去除培养基,用PBS冲洗,再添加适量的胰蛋白酶覆盖细胞,并放入37°C的培养箱中孵育约2分钟(具体时间依据细胞类型调整)。随后添加同体积的培养基以终止消化,用移液枪轻轻吹打细胞,将其转移至50mL的Falcon管中。
  3. 对于悬浮培养细胞,将所需体积的细胞直接转移至50mL Falcon管中。
  4. 使用血细胞计数器计数细胞以确定活力,冷冻保存的细胞活力应至少保持在75%以上。
  5. 在室温下以300× g离心5分钟,随后去除上清液。
  6. 准备冷冻培养基(见表1),并在使用前均匀混合并加热至37°C。

表1:不同哺乳动物细胞系适用的冻存培养基配方
细胞类型 - 冻存培养基配方
  在含有FBS的培养基中培养的细胞 - 90%胎牛血清 + 10%二甲基亚砜
  在无血清培养基中培养的细胞 - 90%条件培养基 + 10%二甲基亚砜
  需要甘油冷冻的细胞 - 90%胎牛血清 + 10%甘油

注意,DMSO不适合所有细胞类型,有些情况下需要使用甘油作为替代。

  1. 加入冻存培养基至所需细胞密度,通常对于哺乳动物细胞,该浓度为1×106/mL。冻存液中细胞暴露的时间不应超过10分钟。
  2. 将1mL样品分装进入冷冻管,并盖紧。
  3. 将冷冻管转移至室温的冷冻盒中,再放置于-80°C冰箱中,确保冷却速度以每分钟1°C的速率稳定下降。
  4. 约24小时后,将冷冻管从冷冻盒中取出并转移至液氮中进行长期储存。一般来说,冷冻细胞可以在液氮中保存数年,而不应在-80°C下保存超过一周,以免损害细胞活力。

第2阶段: 解冻冷冻细胞系

  1. 从液氮储存器中取出冷冻管,迅速放入37°C的水浴中,直至约80%解冻(不可在室温下解冻),此过程应控制在1分钟以内。
  2. 用移液器将冷冻管中的物质转移至含约10mL预热培养基的15mL Falcon管中。
  3. 以300× g离心5分钟,弃上清液,用适量的培养基重悬细胞沉淀。
  4. 将细胞悬液转移至培养容器中,然后置于37°C培养箱中培养。

在生物医疗领域,遵循规范的细胞冷冻和解冻流程至关重要,而俄罗斯专享会284将持续为您提供最可靠的细胞保存解决方案,确保实验的成功和细胞的长期存活。