YF®488/555/594/647的区别

YF®488、YF®555、YF®594和YF®647的主要区别在于它们用于检测EdU时所带的荧光基团不同，因此发射的荧光颜色也各异。尽管实验效果相似，但用户可以根据个人喜好或实际需求进行选择。

EdU试剂盒中BSA的作用

在EdU试剂盒中，3%BSAinPBS的作用在于清洗过程中可以有效终止未反应的甲醛，从而提高实验的准确性和可靠性。

Click-iTEdU检测在活细胞中的应用

Click-iTEdU检测不适合在活细胞中进行。虽然EdU可以进行活细胞的代谢标记，但叠氮化物检测试剂及其缓冲液成分对细胞具有非透过性，因此Click反应必须在固定和通透的样品上进行。

质粒转染的荧光蛋白检测与Click反应的兼容性

质粒转染所表达的荧光蛋白检测与Click反应并不完全兼容。本产品会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光，因此在染色后无法直接检测GFP，建议使用GFP抗体进行间接检测。

解决本底干扰的问题

如果观测到较高的本底干扰，通常是由于洗涤不充分导致的。叠氮化物与炔烃类之间的Click反应很具选择性，生物体内很少会发生副反应。为减少本底干扰，最佳方法是增加BSA清洗的次数。此外，可以在同样的检测条件下设置一组无染料或无Click反应的对照，以排除自发荧光干扰。您也可以在无EdU体系下进行完整的Click反应，以验证Click反应信号的特异性。

提高标记样品信号的方法

标记样品信号低或无信号的原因可能有多方面。以下是提高信号的建议：

1. 确保使用无色的试剂，避免使用发黄的添加剂或缓冲液。
2. 细胞需充分固定和通透，以确保Click反应试剂能到达细胞核。
3. 避免在Click反应前在任何缓冲液或试剂中引入金属螯合剂（如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等），因为铜离子可能与这些物质结合，降低催化Click反应的有效浓度。
4. Click反应有效性依赖于一价铜（Cu+）的化合价。
5. 延长Click反应时间超过30分钟未必能提高信号。建议用新鲜的Click反应试剂进行再次孵育30分钟，以更有效地提高标记效率。

细胞核的复染

为细胞核进行复染时，您可以选择使用试剂盒中配备的Hoechst33342进行核染色，或者选择使用DAPI。

EdU在植物细胞中的应用

EdU作为小分子，可以有效穿透植物细胞的细胞壁，因此，它可用于检测植物细胞核内的DNA复制。

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